狗狗怎么判断细小?
首先,细小的主要症状有:精神沉郁、食欲减退、呕吐、腹泻;发病一天后不再呕吐,开始腹泻;病初粪便呈稀状,随病情发展,粪便呈咖啡色或番茄酱色样血便并混有粘液及粘膜;发病第二天开始剧烈呕吐,呕吐物为胃液,以后变为肠黏液;后期发病动物消瘦脱力,严重者可因失血脱水死亡 。 诊断方法:根据临床症状和流行病学可初步诊断为肠炎型或者出血性肠炎型的细小病毒症。确诊则需要通过实验室检查。
1. 粪便检验:收集新鲜粪便,用灭菌生理盐水(或肥皂水)洗涤肠道内容物去除黏附的部分内容物的粪便表面,将粪便稀释制成10%悬液。取病犬粪便悬液0.2ml于载玻片上,然后加入等量(0.2ml)的兔血清,混合均匀后置37℃温箱中保温30min,待血清完全被粪便吸附后迅速取出。向载玻片中加等量(约0.2ml)的碱性石蜡油溶液,覆盖薄层,盖上盖玻片,轻压使石蜡油均匀分布于粪便与盖玻片之间。 显微镜下观察是否有细小病毒存在。
2. 病毒分离鉴定:采集病犬粪便,将病料剪碎,加适量无菌生理盐水研磨成匀浆,经离心,除去上层液体后,沉淀加入适量无菌生理盐水悬浮备用。 取制备好的病料悬液接种于8~10只健康小鼠腹腔内,观察接种小鼠的临床症状,若小鼠出现精神不振、食欲不振等症状,且体重下降明显时,则表明有细小病毒感染,可以进一步进行病毒分离培养。 从感染后4天开始,连续取小鼠腹水作4次传代,以观察病毒的生长情况。
3. 免疫荧光法检测: 标本预处理:从感染小鼠腹水中吸取少量腹水,置于离心管中,3000r/min室温离心3min,弃去上清液。加入0.01mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液(PBS),振荡混匀,再于3000r/min室温离心5min,重复一次,去除上清液,留取适量细胞碎片作为待检样品。
测定过程: 将待检样品滴加于载玻片的一端,在另一端滴加1:100稀释的羊抗鼠荧光抗体,加盖玻片,轻压使之浸润整个涂片,放置20min,吸去多余液体,于荧光显微镜下寻找绿色荧光颗粒。
注意事项: 操作过程中注意防止荧光消失,应尽量缩短操作步骤,减少荧光颗粒受到损伤的机会;避免非特异性染色,可选用单色荧光进行染色,也可使用双色荧光进行染色以提高阳性率。